如何測(cè)定櫻桃中葉綠素含量
如何測(cè)定櫻桃中葉綠素含量
葉綠素是光合作用最重要的產(chǎn)物，同時(shí)葉綠素的含量也是植物重要的生理指標(biāo)之一。因此，對(duì)櫻桃葉綠素提取方法的研究意義重大。早期葉綠素測(cè)定廣泛采用Arnon法，該方法由于先研磨后除渣，工作量大，步驟多，且容易受光氧化而引起偏差，不適宜田間大量樣品的提取和測(cè)定。陳福明和張憲政等分別對(duì)丙酮、乙醇和水不同配比混合液浸提效果進(jìn)行了深入的研究，得出適宜提取葉片葉綠素的混合液。洪法水等研究認(rèn)為，用丙酮和乙醇的混合液提取植物葉片葉綠素比單一提取液效果要好。而徐邦發(fā)等為解決通常采用分光光度計(jì)費(fèi)工耗時(shí)、易引起離體葉綠素的光分解而造成誤差等問(wèn)題，另外還有現(xiàn)在很通用的葉綠素測(cè)定儀法。葉綠素測(cè)定儀是通過(guò)將葉片夾入儀器頭部，然后按下頭部就可以得到葉片葉綠素含量。非常方便。葉綠素測(cè)定儀有時(shí)也被叫做葉綠素含量?jī)x，SPAD502就是一款最為典型同時(shí)也是測(cè)定最為方便的葉綠素測(cè)定儀。通過(guò)比較幾種不同混合提取液的提取，提出測(cè)定棉花葉片葉綠素含量的丙酮溶液浸提法，該法具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單易行的優(yōu)點(diǎn)。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：試驗(yàn)試劑：乙醇、丙酮、正丁醇（均為分析純）、石英砂。試驗(yàn)儀器與器皿：千分之一電子分析天平、紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、剪刀、研缽、移液管、漏斗、大試管。提取液：80%的丙酮、95%的乙醇、正丁醇、80%的丙酮和95%乙醇的5種混合液（配置比例分別為3∶1，2∶1，1∶1，1∶2，1∶3）8個(gè)處理。在栽培的“龍?zhí)锿砑t”櫻桃樹(shù)中選取有代表性的葉片20片，將其洗凈、吸干、去大葉脈，之后稱取0.1g葉片加入5mL丙酮和少量的石英砂在研缽中進(jìn)行研磨，勻漿后過(guò)濾（用80%丙酮清洗研缽及殘?jiān)�，合并濾液），濾液用不同的有機(jī)試劑定容至10 mL，放入棕色瓶中，再分別加入各種提取液10 mL，放在避光處浸泡葉片24 h，重復(fù)3次。用1∶1的80%丙酮和95%乙醇混合液，從2 h開(kāi)始，每隔2 h用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行比色，分別在波長(zhǎng)為645，663 nm下進(jìn)行光密度值測(cè)定。根據(jù)Lamber-Beer定律，葉綠素a、葉綠素b與不同波長(zhǎng)下光密度值之間的關(guān)系式如下。葉綠素a的含量（mg/g）=（12.71A663-2.59A645）V/W×1000；葉綠素b的含量（mg/g）=（22.88A645-4.67A663）V/W×1000；葉綠素的總含量（mg/g）=（20.29A645+8.04A663）V/W×1000；式中，A645，A663分別為相應(yīng)波長(zhǎng)下的光密度值，V為提取液的體積，W為葉片質(zhì)量。
