如何檢測人工栽培中藥材的農(nóng)藥殘留
來源： http://www.52lvi.cn/ 類別：實用技術(shù) 更新時間：2013-01-29 閱讀次
【本資訊由中國糧油儀器網(wǎng)提供】 近年來，隨著中藥材的需求量擴大，天然的中藥材已不能滿足市場供給需求，目前大部分中藥材依賴人工栽培。為提高種植中藥材產(chǎn)量，藥農(nóng)按照種植農(nóng)作物的方法頻繁使用農(nóng)藥。為此，世界衛(wèi)生組織曾在制定植物藥的一般檢驗方法和質(zhì)量標準時提出農(nóng)藥殘留量測定的問題。目前，農(nóng)藥殘留量的檢測方法主要有氣相色譜法、氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜法、液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法和薄層色譜法及農(nóng)藥殘留速測儀法等。農(nóng)藥殘留中的有機磷類農(nóng)藥分子量較小，易氣化，適合于氣相色譜測定。本研究采用乙腈為提取溶劑，樣品濃縮干燥后經(jīng)石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱提純，丙酮定容，通過DB－7毛細管柱和FPD檢測器進行氣相色譜定性和定量。樣品預(yù)處理步驟簡單，具有較高的靈敏度、準確度和精密度，適合在基層單位推廣使用。
將裝有農(nóng)藥標準品敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果、樂果、氯唑啉、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、殺撲磷的安瓿瓶從冰箱中取出，室溫放置15min后打開，分別吸取0.5mL置于50mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，配成濃度均為1.0μg/mL的有機磷類混合標準使用溶液，待用。取供試品，粉碎，過二號篩，取約5.0g(準確至0.01g)于50mL具塞離心管中，加入乙腈30mL，超聲提取30min，離心，取上清液，過無水硫酸鈉脫水，脫水后的溶液收集于100mL平底燒瓶中；沉淀物加入乙腈20mL超聲，離心，脫水，液體合并于平底燒瓶中，45℃水浴減壓濃縮近干，待下一步凈化。用丙酮：二氯甲烷(1∶1)的混合溶液5mL預(yù)淋洗石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱，棄去淋洗液，平底燒瓶中的濃縮提取物用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液洗滌3次，每次1mL，洗液過石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱，液面到達石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱表面后再用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液12mL洗脫，收集此洗脫液15mL于50mL平底燒瓶中，濃縮近干，加入丙酮1mL溶解并定容，旋渦混勻，樣品上氣相色譜進行分析。色譜條件：色譜柱：DB－17毛細管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm，Agilent公司)；載氣：氮氣，純度≥99.999%；進樣口溫度：250℃；進樣方式：不分流進樣；FPD檢測器；檢測器溫度：270℃；柱溫：采用程序升溫，初始溫度70℃(保持2min)，以每分鐘25℃升至150℃(保持0min)，以每分鐘3℃升至200℃(保持0min)，以每分鐘8℃升溫至230℃(保持5min)；進樣量為1.0μL。有機磷標準曲線的制作準確吸取1.0、3.0、5.0、7.0mL的有機磷類混合標準使用溶液置于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度混勻，有機磷類混合標準系列濃度分別為0.10、0.30、0.50、0.70μg/mL，1.0μg/mL直接測定使用液。取1.0μL各濃度標準溶液進行氣相色譜測定，以不同有機磷農(nóng)藥出峰的保留時間定性，峰面積定量。以每種有機磷農(nóng)藥的不同濃度所對應(yīng)的峰面積繪制10種有機磷農(nóng)藥的標準曲線。
根據(jù)10種有機磷農(nóng)藥的標準色譜圖各組分的保留時間定性，外標法定量。10種有機磷農(nóng)藥的標準色譜圖。將5個濃度標準系列的混合標準溶液分別上機分析，以各有機磷農(nóng)藥的峰面積對濃度做標準曲線，以3倍信噪比計算各農(nóng)藥的檢出限(LOD)，以10倍的信噪比計算各農(nóng)藥的定量限(LOQ)。線性方程、相關(guān)系數(shù)、最低檢出限和最低定量限。在0.10～1.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。方法的最低檢出限為0.0058～0.060mg/kg，其中6種有機磷殘留物的檢測限＜0.010mg/kg，符合多殘留檢測要求。最低定量限為0.019～0.20mg/kg。
在相同的色譜條件下，對已制備的大黃、甘草、黨參、黃芪、枸杞子5種中藥材進行有機磷農(nóng)藥殘留加標回收測定，混合標準溶液添加量為0.5mg/kg，平行測定6次，樣品加標回收率和精密度試驗。10種有機磷農(nóng)藥加標回收率在67.1%～120.0%之間，相對標準偏差(RSD)＜6.0%，該檢測方法符合多種農(nóng)藥殘留量的要求。
農(nóng)藥殘留的提取是農(nóng)藥殘留檢測中很關(guān)鍵的一步，“常用的提取劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈”。丙酮作為極性較強并與水相溶的提取溶劑，能溶解多數(shù)農(nóng)藥，且過濾和溶解都很容易，但丙酮又能大量提取植物組織中的油脂和色素，為下一步凈化帶來困難。乙酸乙酯萃取脂溶性物質(zhì)，提取機磷類農(nóng)藥的能力較差。乙腈極性較大，分子小，作為提取溶劑，可有效減少中藥材中含有的色素或脂肪等成分對后續(xù)的凈化分析帶來的影響，被美國分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC法)所采用，也是我國目前常用的提取溶劑，適合有機磷類農(nóng)藥的提取，且操作簡單，在有機磷農(nóng)殘測定中是首選提取溶劑。
針對有機磷農(nóng)藥測定特點，國內(nèi)外推薦3種凈化方式：C18固相萃取、單一石墨化碳(CARB)固相萃取和氨基(NH2)固相萃取、石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取”。在有機磷農(nóng)藥樣品凈化的過程中，C18固相萃取主要去除部分脂溶性色素和油脂類成分，采用單一的石墨化碳(CARB)固相萃取柱可除去色素，但對植物脂肪無法除去，石墨化碳(CARB)固相萃取柱和氨基(NH2)固相萃取柱分開使用，增加樣品凈化操作步驟。石墨化碳(CARB)固相萃取柱/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取可有效去除色素、植物脂肪、蛋白等雜質(zhì)，樣品凈化效率較高且減少凈化步驟，目前在有機磷農(nóng)殘測定的樣品凈化中作為首選方法。
將裝有農(nóng)藥標準品敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果、樂果、氯唑啉、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、殺撲磷的安瓿瓶從冰箱中取出，室溫放置15min后打開，分別吸取0.5mL置于50mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，配成濃度均為1.0μg/mL的有機磷類混合標準使用溶液，待用。取供試品，粉碎，過二號篩，取約5.0g(準確至0.01g)于50mL具塞離心管中，加入乙腈30mL，超聲提取30min，離心，取上清液，過無水硫酸鈉脫水，脫水后的溶液收集于100mL平底燒瓶中；沉淀物加入乙腈20mL超聲，離心，脫水，液體合并于平底燒瓶中，45℃水浴減壓濃縮近干，待下一步凈化。用丙酮：二氯甲烷(1∶1)的混合溶液5mL預(yù)淋洗石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱，棄去淋洗液，平底燒瓶中的濃縮提取物用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液洗滌3次，每次1mL，洗液過石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱，液面到達石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取柱表面后再用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液12mL洗脫，收集此洗脫液15mL于50mL平底燒瓶中，濃縮近干，加入丙酮1mL溶解并定容，旋渦混勻，樣品上氣相色譜進行分析。色譜條件：色譜柱：DB－17毛細管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm，Agilent公司)；載氣：氮氣，純度≥99.999%；進樣口溫度：250℃；進樣方式：不分流進樣；FPD檢測器；檢測器溫度：270℃；柱溫：采用程序升溫，初始溫度70℃(保持2min)，以每分鐘25℃升至150℃(保持0min)，以每分鐘3℃升至200℃(保持0min)，以每分鐘8℃升溫至230℃(保持5min)；進樣量為1.0μL。有機磷標準曲線的制作準確吸取1.0、3.0、5.0、7.0mL的有機磷類混合標準使用溶液置于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度混勻，有機磷類混合標準系列濃度分別為0.10、0.30、0.50、0.70μg/mL，1.0μg/mL直接測定使用液。取1.0μL各濃度標準溶液進行氣相色譜測定，以不同有機磷農(nóng)藥出峰的保留時間定性，峰面積定量。以每種有機磷農(nóng)藥的不同濃度所對應(yīng)的峰面積繪制10種有機磷農(nóng)藥的標準曲線。
根據(jù)10種有機磷農(nóng)藥的標準色譜圖各組分的保留時間定性，外標法定量。10種有機磷農(nóng)藥的標準色譜圖。將5個濃度標準系列的混合標準溶液分別上機分析，以各有機磷農(nóng)藥的峰面積對濃度做標準曲線，以3倍信噪比計算各農(nóng)藥的檢出限(LOD)，以10倍的信噪比計算各農(nóng)藥的定量限(LOQ)。線性方程、相關(guān)系數(shù)、最低檢出限和最低定量限。在0.10～1.0μg/mL的濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。方法的最低檢出限為0.0058～0.060mg/kg，其中6種有機磷殘留物的檢測限＜0.010mg/kg，符合多殘留檢測要求。最低定量限為0.019～0.20mg/kg。
在相同的色譜條件下，對已制備的大黃、甘草、黨參、黃芪、枸杞子5種中藥材進行有機磷農(nóng)藥殘留加標回收測定，混合標準溶液添加量為0.5mg/kg，平行測定6次，樣品加標回收率和精密度試驗。10種有機磷農(nóng)藥加標回收率在67.1%～120.0%之間，相對標準偏差(RSD)＜6.0%，該檢測方法符合多種農(nóng)藥殘留量的要求。
農(nóng)藥殘留的提取是農(nóng)藥殘留檢測中很關(guān)鍵的一步，“常用的提取劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈”。丙酮作為極性較強并與水相溶的提取溶劑，能溶解多數(shù)農(nóng)藥，且過濾和溶解都很容易，但丙酮又能大量提取植物組織中的油脂和色素，為下一步凈化帶來困難。乙酸乙酯萃取脂溶性物質(zhì)，提取機磷類農(nóng)藥的能力較差。乙腈極性較大，分子小，作為提取溶劑，可有效減少中藥材中含有的色素或脂肪等成分對后續(xù)的凈化分析帶來的影響，被美國分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC法)所采用，也是我國目前常用的提取溶劑，適合有機磷類農(nóng)藥的提取，且操作簡單，在有機磷農(nóng)殘測定中是首選提取溶劑。
針對有機磷農(nóng)藥測定特點，國內(nèi)外推薦3種凈化方式：C18固相萃取、單一石墨化碳(CARB)固相萃取和氨基(NH2)固相萃取、石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取”。在有機磷農(nóng)藥樣品凈化的過程中，C18固相萃取主要去除部分脂溶性色素和油脂類成分，采用單一的石墨化碳(CARB)固相萃取柱可除去色素，但對植物脂肪無法除去，石墨化碳(CARB)固相萃取柱和氨基(NH2)固相萃取柱分開使用，增加樣品凈化操作步驟。石墨化碳(CARB)固相萃取柱/氨基(NH2)串聯(lián)固相萃取可有效去除色素、植物脂肪、蛋白等雜質(zhì)，樣品凈化效率較高且減少凈化步驟，目前在有機磷農(nóng)殘測定的樣品凈化中作為首選方法。
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