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葉綠素是一類與光合作用密切相關(guān)的色素。植物在光合作用時(shí)，所需的原料--光就是通過葉綠素吸收的，同時(shí)植物光合作用還需要二氧化碳、水分等物質(zhì)，通過光的照射，合成植物能夠吸收利用的有機(jī)物。高等植物葉綠體中的葉綠素主要有葉綠素a 和葉綠素b 兩種（分子式： C40H70O5N4Mg）屬于合成天然低分子有機(jī)化合物。下面介紹下如何提取植物葉綠素。當(dāng)然如果我們需要測(cè)定葉綠素的含量，我們推薦您使用葉綠素儀或者手持葉綠素儀，手持葉綠素儀是可以帶到田間，拿在手上測(cè)定植物葉綠素的含量的。它是一款小巧的儀器，只需將葉片放在儀器的一個(gè)帶有光線的位置，然后儀器的顯示屏上就能夠?qū)崟r(shí)顯示植物葉綠素的含量。

1：把新鮮的葉子剪碎，放在燒瓶中，加水使之淹沒。用酒精燈加熱煮沸，倒去水后，加入70～75％酒精（所加的量，仍以淹沒為宜）。在瓶口插上一個(gè)玻璃漏斗，把燒瓶放在水浴鍋中加熱煮沸。若沒有水浴鍋，可用大燒杯代替。由于葉子內(nèi)的色素溶解在酒精中，所以燒瓶?jī)?nèi)的溶液逐漸變?yōu)樯罹G色。然后過濾（過濾時(shí)，濾紙要用70～75％的酒精潤(rùn)濕，并且要緊貼在漏斗壁上）。 取3毫升濾液放入一支干凈試管，再加入5毫升汽油和幾滴水，用大拇指按緊管口，上下?lián)u動(dòng)幾分鐘，在試管架上 放置片刻后，則溶液分成上下兩層，上層是輕的汽油層，主要含有葉綠素及胡蘿卜素，故顯綠色。下層是酒精層，主要含有葉黃素，故顯黃色。

2：制取葉綠素

萃取葉綠素的萃取罐一般用6毫米厚的鋼板焊接而成。

①萃取溶劑的選擇

萃取溶劑通常用高濃度丙酮為最佳，因?yàn)槿~綠素極易溶于丙酮，且丙酮的沸點(diǎn)低(56.2℃)，易濃縮也易回收。加熱濃縮時(shí)葉綠素?zé)岱纸馕锷�，產(chǎn)品色調(diào)好，達(dá)到終點(diǎn)溫度低，時(shí)間短。

②萃取葉綠素的操作與條件

i．投料 投料前在抽提罐的鋼篩板上墊上竹篩或?yàn)V布。經(jīng)試氣后確定無漏氣時(shí)，將軟化后的蠶糞由投料口投入。

ii．脫水 蠶糞水洗、軟化需要水，但若含水較多，則一方面使丙酮濃度降低，不易浸出葉綠素，相反地脂肪、蠟份及一些水溶性色素卻會(huì)在其萃取液中增加其比例；另一方面，由于萃取液丙酮濃度偏低，含水相對(duì)增多，對(duì)濃縮收糊造成困難。因此，脫水這一步也是決定產(chǎn)品質(zhì)量?jī)?yōu)劣的重要一環(huán)。

iii．萃取葉綠素 由于葉綠素在蠶糞(固相)與溶劑丙酮(液相)之間的分配是有一定規(guī)律的，要實(shí)現(xiàn)葉綠素由固相向液相迅速轉(zhuǎn)換，就必須控制好萃取的條件。

a．丙酮濃度 一般是96％以上為佳，丙酮濃度的調(diào)節(jié)有時(shí)也結(jié)合脫水程度、萃取浴比等因素進(jìn)行考慮。

b．萃取的時(shí)間和溫度 生產(chǎn)中萃取時(shí)既想提高葉綠素萃取率，又希望盡量縮短時(shí)間，以充分發(fā)揮設(shè)備的作用�？s短時(shí)間可以通過提高溫度、使用回流和增加丙酮的途徑來實(shí)現(xiàn)。

c．萃取液的pH值調(diào)節(jié) 蠶糞中含有氨，而且往往混有石灰，因此萃取液呈堿性(pH7.5～8)這樣可以保持葉綠素的穩(wěn)定性，而且可以避免設(shè)備的腐蝕。但鈣離子的存在會(huì)使葉綠素形成不易溶于丙酮的葉綠酸鈣而損失掉，另一方面，丙酮在反復(fù)使用中會(huì)受其影響而變質(zhì)。因此最好將pH值調(diào)節(jié)在中性或微酸性范圍內(nèi)。

③濃縮產(chǎn)品及溶劑回收

i．葉綠素蒸發(fā)濃縮的設(shè)備，即濃縮罐，通常采用夾套式蒸發(fā)器。

ii．濃縮的操作與條件

a．操作 將葉綠素萃取液通過流量計(jì)注入濃縮罐。通入蒸氣于濃縮罐夾套中，加熱葉綠素濃縮液，使丙酮受熱蒸發(fā)至冷凝器冷凝，以達(dá)到回收溶劑之目的。丙酮蒸發(fā)的同時(shí)，葉綠素萃取液開始濃縮，用蒸汽加熱時(shí)，要經(jīng)常注意氣壓的變化，以防止溫度突然升高。當(dāng)葉綠素液濃縮到一定程度后，可升高溫度，以便將殘留的丙酮驅(qū)除。濃縮完成后趁熱放料，冷到常溫時(shí)，葉綠素呈糊狀浮于表面，放去下層黑褐色下腳水，即為成品。最后，將多批成品攪拌混合4小時(shí)以上，即可裝桶。

b．條件 蒸發(fā)濃縮的過程中，混合液的沸點(diǎn)是隨著液體中溶質(zhì)的濃度增大而逐步上升的，純丙酮的沸點(diǎn)為56.2℃，而葉綠素丙酮液的共沸點(diǎn)是不斷變化的。

控制共沸點(diǎn)不但能保證葉綠素的質(zhì)量，而且與回收丙酮的濃度及濃縮物中的黃水濃度都有直接關(guān)系。

④產(chǎn)品收集

糊狀葉綠素比35％以下的稀丙酮輕，且不溶于35％以下的稀丙酮，因此，懸浮在濃縮液中形成懸濁液，當(dāng)我們?cè)诜艥饪s物的時(shí)候，一定要慢慢放入，并充分靜置，使其糊水分離，一般靜置1小時(shí)以上。這樣既避免將糊從黃水(下腳水)中帶走，又保證了糊水分離效果好

3：我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室中提取葉綠素最簡(jiǎn)便的方法就是用丙酮（濃度96%）乙醇（濃度98%）1：1混合液，將葉片浸在溶液中，放在暗處2小時(shí)，便可提取的十分干凈。

4：葉綠素的提取

▲ 將新鮮菠菜(Spinacia)葉片洗凈擦干,去葉柄及葉脈.稱取樣品 8g,剪碎置研

缽內(nèi)（加入少量碳酸鈣）,加入8cm3丙酮及少許固體碳酸鈉,迅速研磨成勻漿;然后再加入20cm3丙酮充分研磨.

▲ 在一玻璃漏斗底部墊一小團(tuán)脫脂棉,將勻漿通過脫脂棉過濾至已裝有20cm3石油醚

的分液漏斗中,再用少量的丙酮沖洗葉片殘?jiān)�及研�?合并濾液.

▲ 沿分液漏斗的壁小心加入40cm3蒸鎦水,輕輕搖動(dòng),使色素轉(zhuǎn)移到上面的石油醚層

靜置數(shù)分鐘,待分層清楚后棄去下面的丙酮一一水層.如發(fā)生乳化現(xiàn)象可加入2-3cm3飽和

NaCl溶液.

▲ 在分液漏中再加入40cm3蒸鎦水,輕輕搖動(dòng),以洗去石油醚中殘留的丙酮,共洗兩

次.然后將葉綠素的石油醚提取液放入具塞錐形瓶中,置暗處或用黑紙包好備用。